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2×BB Fast qPCR Mix图片
产品货号:
GS2293
中文名称:
2×BB Fast qPCR Mix
英文名称:
2×BB Fast qPCR Master Mix
产品规格:
1mL|5mL
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价

本制品是一种即用型PCR预混合液,含有抗体介导的快速热启动Taq DNA聚合酶,SYBR Green I荧光染料,MgCl2,dNTP Mix和一些稳定剂。提供的2×Master Mix包含除引物、模板外的所有组分,用于实时qPCR过程中DNA的扩增和检测。


抗体介导的快速热启动Taq DNA聚合酶和独有的缓冲系统减少了引物二聚体的形成,增强了扩增的特异性和效率,确保了SYBR Green I实时qPCR的准确性。另外,BB Fast qPCR Master Mix中的SYBR Green I是实时PCR专用染料,对热启动Taq DNA聚合酶的酶活具有少量抑制性。因此合适浓度的SYBR Green I不仅能确保实时qPCR具有较强的荧光强度,还提高了检测的灵敏性。简单来说,就是BB Fast qPCR Master Mix具有较好的扩增效率及检测灵敏度。DNF Buffer专用于存在多个非特异性扩增位点的引物。对于一些没有很好引物的DNA序列,DNF Buffer可根据下列方法加入到反应体系中。


2×BB Fast qPCR Mix不含有ROX参考染料,适用于无需ROX参考染料进行校正的实时PCR仪器,如Rotor-Gene,DNA Engine Opticon,Opticon 2,Chromo 4 Real-Time Detector,Mastercycler ep realplex,SmartCycler,Roche LightCycler 480,Roche LightCycler Nano,Bio-Rad CFX96,和Illumina Eco。




组分1mL5mL
2×BB Fast qPCR Master Mix1mL1mL×5
DNF Buffer200μL 1ml
Sterilized ddH2O1mL1mL×5

保存:-20℃,避免反复冻融。


  • 配制反应体系
    • 溶解并混匀各组分,短暂离心;
    • 根据下表准备反应体系:
      成分用量终浓度
      2×BB Fast qPCR Master Mix10μL
      10μM Forward Primer0.4μL200 nM
      10μM Reverse Primer0.4μL200 nM
      Template DNAAs required<20ng/20μL
      DNF Buffer (Optional)2μL0.5M
      PCR-grade water至20μLN/A
      注:
      ① 每20μL反应体系中最多加入20ng的基因组DNA或质粒DNA。
      ② 每20μL反应体系中使用至多1μg总RNA反转录成的cDNA原液或稀释的cDNA。
      ③ DNF Buffer只加入到引物存在多个非特异扩增位点的反应体系中。普通引物勿加。
  • 运行qPCR
    根据下列循环程序运行qPCR:
    步骤温度持续时间循环数
    预变性95℃3min保持
    变性95℃1~3s40
    退火/延伸/数据采集60℃20~30s
    溶解曲线分析根据仪器推荐程序设置
    注:对于三步法的循环程序,在最佳退火温度下退火20s后,根据仪器推荐设置,在72℃下设置采集数据所需的最小时间。



问题可能原因意见建议
荧光强度低或无不正确操作SYBR Green I染料对光敏感;避免暴露在光下及反复冻融。使用前彻底溶解和混匀溶液。
无目的扩增产物始终使用纯化过的高质量完整DNA作为模板。琼脂糖凝胶电泳分析模板完整性;
确保引物可用;
循环程序缺乏必要步骤,检查循环程序。
引物浓度过低使用引物终浓度为0.1~0.5μM。
无模板的对照组出现阳性信号(NTC)污染扔掉所有试剂,清洗所有移液枪及其表面,准备新鲜的引物贮备液等。
形成引物二聚体退火温度不是最优。
检查引物设计及其特异性。
引物设计不完善。
样品溶解曲线出现第二个非特异的峰起始模板太多减少起始模板量。
延伸时间太长如果使用的是三步法,根据机器推荐设置,确保在72℃使用的延伸时间是数据采集需要的最小时间。
引物设计不完善重新设计具有良好特异性的引物。

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